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《灵芝的现代研究》:第四章 灵芝的化学成分: 第一节 三萜类
灵芝类所含化学成分复杂,且因所用菌种培养方法、提取方法等不同而异。研究灵芝类的化学成分的目的,在于了解和比较灵芝属不同品种及同一品种的不同发育阶段(如子实体、菌丝体、孢子体)所含的化学成分,通过药理及临床研究确定其有效成分或有效部分。为进

灵芝类所含化学成分复杂,且因所用菌种培养方法、提取方法等不同而异。研究灵芝类的化学成分的目的,在于了解和比较灵芝属不同品种及同一品种的不同发育阶段(如子实体、菌丝体、孢子体)所含的化学成分,通过药理及临床研究确定其有效成分或有效部分。为进一步研究灵芝药理作用机制、提高临床疗效、改进生产工艺及质量控制标准提供理论根据。目前研究较多的灵芝化学成分有:三萜类化合物、多糖类、核苷类、甾醇类、生物碱类、呋喃衍生物、氨基酸多肽类、无机元素、脂肪酸等。

第一节 三萜类化合物

三萜类化合物是灵芝的主要化学成分之一,灵芝中的很多三萜类化合物具有生理活性,如ganoderic acid A. B. C.和D能够抑制小鼠肌肉细胞组胺的释放。ganoderic acid F有很强的抑制血管紧张素酶的活性。赤芝孢子酸A对CCl4和半乳糖胺及丙酸杆菌造成的小鼠转氮酶升高均有降低作用。赤芝孢子内酯A具有降低胆固醇作用。因此对三萜类化合物的进一步深入研究将有利于灵芝有效成分的寻找和进一步阐明其生理活性。

1982年Kubota. T等人首次从赤芝子实体中分离得到三萜类化合物,此后十年来,对三萜类化合物研究最多的是日本,其次是中国(包括台湾)。到目前为止已先后从赤芝子实体和孢子粉中分到了103种新的三萜类化学成分

一、三萜类化合物提取和分离

灵芝中三萜类化合物的提取分离方法可以分为三类,一类是用甲醇或者乙醇提取原料,提取物直接进行层析分离,如H. Konda等用甲醇提取原料,提取物浓缩后悬浮于水,依次用已烷、乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯部分经硅胶色谱、高效液相层析(HPLC)分到四个三萜酸。第二类方法是用甲醇、乙醇等提取原料,然后分出总酸部分,进行分离,如Morigiwa等人用70%甲醇提取原料,提取物用1mol/L HCl调pH2~3,再用乙酸乙酯萃取,浓缩后进行分离,分到五个三萜类化合物。Nishitoba等人用乙醇提取原料,提取物浓缩后在水和CHCl3中进行分配,CHCl3层浓缩至一定体积后,用饱和的NaHCO3水溶液萃取,萃取物用6mol/L HCl酸化到pH3~4,水溶液中出现的沉淀以CHCl3溶解,干燥后得总酸提取物,经硅胶柱层析分到五个三萜类化合物。第三类方法是利用制备衍生物的方法进行分离,如KiKuchi等用乙醚提取原料,其酸性部分用重氮甲烷进行甲基化,然后再在硅胶柱上进行分离,从中分到七个三萜酸。Hirotani等用90%MeOH-H2O提取,提取液减压浓缩后加入5%Na2CO3水溶液碱化至pH9,然后用CHCl3萃取,水层用4mol/L H2SO4酸化至pH2,再用CHCl3萃取,CHCl3萃取液用水洗,Na2SO4干燥,浓缩后得总酸部分,该部分再以常规方法用重氮甲烷进行甲酯化,硅胶柱色谱,得到三个新的三萜酸。

灵芝中三萜化合物的分离大多是经过反复硅胶柱层析,较纯的部分薄层、低压柱,高效液相色谱(正反相)制备等方法进行分离纯化。硅胶柱色谱一般常用的展开剂为MeOH-CHCl3,EtAc-C6H6,EtoAc-acetone,EtOAc-CHCl3,CHCl3-MeOH-H2O等系统。HPLC多用乙腈—乙酸铵缓冲溶液以及MeOH-H2O洗脱。薄层检查一般使用的展开剂为CHCl3-MeOH(95∶5,9∶1V/V)或苯—乙酸乙酯(3∶7V/V),香兰醛-硫酸做为薄层斑点的显色剂。

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