灵芝的作用

提要灵芝的热水提取物250或500mg/kg口服可以明显降低因D-氨基半乳糖和内毒素合用导致中毒的小鼠血清谷丙转氨酶的活力升高。灵芝在试管内能减少大鼠原代培养肝细胞受四氨化碳中毒时释放的乳酸脱氢酶及谷丙转氨酶。灵芝也降低口服四氯化碳导致肝中毒的小鼠血清谷丙转氨酶活力。由此证明灵芝对于受损的动物肝脏有一定的保护作用。
关键词灵芝；动物肝损伤；谷丙转氨酶
灵芝是高等真菌GanodermaLucidum,Fr.Karst的子实体，在中国传统用作补药及镇静药。根据《本草纲目》记载，灵芝能补五脏之气。本文研究灵芝的热水提取物对肝脏损伤动物病理模型的作用。
1967年发现D-氨基半乳糖可引起大鼠肝脏受损并称其病理变化与人类肝炎病变有一定相似性。但动物对D-氨基半乳糖的敏感性存在较大的种属与个体差异，小鼠远不及大鼠敏感。有报道内毒素可以增加D-氨基半乳糖的毒性[1]。本实验着重研究D-氨基半乳糖及内毒素对小鼠肝脏的损害作用，并观察灵芝对此损害的影响。此外，四氯化碳是一种经典的肝毒剂，本研究分离大鼠肝细胞观察四氯化碳对原代培养肝细胞的损害，并整体引致小鼠中毒，观察灵芝对该中毒的影响。
材料与方法
动物
昆明种小鼠，21～26g;SpragueDanley(SD)种大鼠，180～220g。♂♀兼用。均由上海医科大学实验动物部供应。
试剂
灵芝热水提取物由日本和汉生药研究所提供，为棕黄色粉末。取一定量灵芝提取物溶于0.2%羧甲基纤维素钠（CMC），作整体动物研究。灵芝溶于生理盐水中于80℃水浴振荡2h后离心为水溶性部分（PartA）。在振荡后经三次快速冻融，然后离心，上清称为冻融部分（PartB），作试管内研究用。
D-氨基半乳糖（D-Galactosamine,Galn）由重庆医科大学制备。内毒素（Endotoxin,ET）O55B5由第二军医大学制备。I型胶原蛋白酶为Sigma产品。RPMI-1640培养基为GIBCO产品，含Hepes15mM，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml及小牛血清10%。
D-氨基半乳糖与内毒素所致小鼠中毒模型
小鼠随机分为4组：第一组对照；第二组腹腔注射D-Galn500mg/kg30min后再腹腔注射ET100μg/鼠；第三组单独腹腔注射ET；第四组单独腹腔注射D-Galn。给毒剂后10h，分别取血，分离血清，测定血清谷丙转氨酶（GPT）及谷草转氨酶（GOT）活力。
灵芝对联合中毒小鼠肝脏的保护作用
小鼠随机分成三组：第一组腹腔注射D-Galn500mg/kg及ET100μg/鼠作对照；第二、三组分别口服灵芝250或500mg/kgqd.×2。最后一次服用灵芝后1h，腹腔注射D-Galn及ET。给毒剂后10h，小鼠摘眼球取血、分离血清，测GPT及GOT。
血清中IL-1活性测定
上述各组小鼠血清以BALB/c小鼠的胸腺细胞生物检测其IL-1含量。选用BALB/c小鼠，分离胸腺，进而分离胸腺细胞，尼龙网过滤，离心，洗2次，计数，调至1×107/ml含ConA2.5μg/m。取96孔培养板，每孔加入胸腺细胞0.1ml及稀释血清0.1ml，37℃5%CO2中培养72h。终止培养前6h，每孔加入3H-TdR9.25kBq。培养结束后将细胞收集于纤维薄膜，β-液闪仪测cpm值。
大鼠离体肝细胞的制备及灵芝对CCl4中毒的保护作用
按Berry和Friend法分离大鼠肝细胞：大鼠于乙醚麻醉下门静脉插管，恒压灌流，流量9ml/min。开始时先灌流无Ca2 的生理溶液A（96mMNaCl,1.4mMKCl,0.74mMMgSO4,2.5mMKH2PO4,30mMNaHCO3及21.7mM葡萄糖酸钠），持续通入95%O2/5%CO2的混合气体，pH7.4,恒温37℃。洗净肝脏内血液后，灌B液，含0.02%胶原蛋白酶，持续灌流8min。然后灌C液，含Ca2 及牛血清白蛋白1%，持续灌流4min。分离肝脏，置烧杯中，溶液含Ca2 及牛血清白蛋白，剪破肝脏包膜，释出肝细胞，于水浴中振荡数分钟，尼龙网过滤细胞，离心500rpm1min。再洗2次。细胞于RPMI-1640溶液中计数，台盼蓝测活力应达90～92%，调节细胞浓度至5×106/ml。于24孔板中，每孔加入1ml。每组复管3孔。加入不同浓度灵芝（最终达0.01～10mg/ml）及20μlCCl4，5%CO237℃培育1h，离心3000rpm,10min,分离上清，测定肝脏释放的乳酸脱氢酶（LDH）及GPT，以加入1%TritonX-100后肝脏细胞释放的酶活力为酶活力之总值[3]。

治疗方法：根据患者提供的详细病情、病因、症状、发病时间及以往病史和检查结果,采用中医辩证，西医辨病，结合祖传经验方剂，辩证施治，灵活运用，随症加减。临床取得了理想的疗效..使求医的患者少走弯路，早日康复。